დოკუმენტის ვერსია 1 (04/12/24)
მოსამზადებელი ფურცელი
PCR კოლონია
სკრინინგვ

OT-2 თხევადი მართვის რობოტი

ავტორი კლეი რაიტი, ფ.
ვირჯინიის ტექნიკური ბიოლოგიური სისტემების ინჟინერიის დეპარტამენტი
Educator Guide PCR კოლონიის სკრინინგი

მიზანი

დღეს მიზანია სტუდენტებმა დაადგინონ კოლონიები, რომლებიც შეიცავენ სწორად აწყობილ პლაზმიდურ დნმ-ს PCR-ის გამოყენებით, რომელიც დანერგილია OT-2 სითხეებით მომუშავე რობოტში და Opentrons პროტოკოლის დიზაინერი.
ამისათვის სტუდენტებს დასჭირდებათ:

• იდენტიფიცირება პრაიმერები, რომლებიც ampგააცოცხლეთ ფრაგმენტი, რომელიც მოიცავს შეერთებას ვექტორის ხერხემალსა და ჩასმას შორის
• გაიგეთ სახელმძღვანელო E. coli PCR კოლონიის სკრინინგის პროტოკოლი
• გამოიყენეთ პროტოკოლის დიზაინერი OT-2 E. coli PCR კოლონიის სკრინინგის პროტოკოლის შესაქმნელად

სტუდენტური აუდიტორია

ეს ლაბორატორია შექმნილია ვირჯინიის ტექნიკური უნივერსიტეტის ბიოლოგიური სისტემების ინჟინერიის კოლეჯის საშუალო და უმაღლესი საფეხურის სტუდენტებისთვის (BSE 3984).
ლაბორატორიას შეუძლია კლასების უმეტესობის მოთავსება, რადგან OT-2 პროტოკოლს აწარმოებს ინსტრუქტორი და არა ცალკეული სტუდენტები.

ფონური ცოდნა

სტუდენტები უნდა მოვიდნენ ლაბორატორიაში ხელით პიპეტინგის, კოლონიის სკრინინგის, დნმ-ის კონცეპტუალური გაგებით ampლიფაცია და გელის ელექტროფორეზის შედეგების გაშვება/ინტერპრეტაცია.

ძირითადი კომპეტენციები

ლაბორატორიული უნარები
პიპეტირება, სampმომზადება და ლაბორატორიული ავტომატიზაციის მოწყობილობების გამოყენება
კრიტიკული აზროვნება
გელის ელექტროფორეზის შედეგების ინტერპრეტაცია, პრობლემების მოგვარება, ავტომატიზაციის დიზაინი ეფექტურობისთვის, ავტომატიზაციის მიდგომების გათვალისწინებით

მარაგები

Opentrons აღჭურვილობა

• P20 ერთარხიანი GEN2
• P300 ერთარხიანი GEN2
• Opentrons 96 Tip Rack 20 μL
• Opentrons 96 Tip Rack 300 μL
• გამათბობელი-შეიკერი GEN1
• NEST 96 Well Plate 100 μL PCR სრული ქვედაკაბა
• Opentrons 24 Tube Rack with Eppendorf 1.5 მლ
  Safe-Lock Snapcap

რეაგენტები

• DI წყალი
• OneTaq® 2X PCR Master Mix სტანდარტული ბუფერით
• Forward Primer 1
• საპირისპირო პრაიმერი 1
• Forward Primer 2
• საპირისპირო პრაიმერი 2

ექსპერიმენტის ხანგრძლივობა

აუცილებელი კლასის სესიები 1
ლაბორატორიის მუშაობის დრო
სავარაუდო საერთო დრო: 2.5-3 საათი

• დასრულდაview და რეview სახელმძღვანელო პროტოკოლის (ნაწილი პირველი): 10 წუთი
• OT-2 პროტოკოლის შედგენა Opentrons პროტოკოლის დიზაინერზე (ნაწილი მეორე): 35 წუთი
• ოქმის წარდგენა, კონსენსუსის ოქმის შესახებ გადაწყვეტილების მიღება: 15 წუთი
• გაშვების პროტოკოლი, კოლონიაში ჩაძირვა, PCR როგორც კლასი (ნაწილი მესამე): 1.5 საათი

ძირითადი პრობლემების მოგვარება

1. გააკეთეთ საცდელი გაშვება გაკვეთილის წინ; ამ გზით ნებისმიერი მოულოდნელი შემთხვევის მოგვარება შესაძლებელია სტუდენტების მოსვლამდე.
2. თეფშების დამრტყმელ ფირფიტებთან დაკავშირებული პრობლემები თითქმის ყოველთვის გამოწვეულია ალტერნატიული ლაბორატორიული ტექნიკის ან რობოტის კალიბრაციის გამო. თუ თქვენ განიცდით ამას და დაადასტურეთ სწორი ლაბორატორიული მოწყობილობა, სცადეთ რობოტის ხელახლა კალიბრაცია.
3. თუ გსურთ დაუკავშირდეთ Opentrons-ის მხარდაჭერას, გთხოვთ, აცნობეთ მათ, რომ თქვენ ხართ ჩვენი Opentrons for Education პროგრამის ნაწილი და თქვენი შემდეგი ლაბორატორიული გაკვეთილის თარიღი.

აუცილებელი წინალაბორატორიული აქტივობები

ამ ლაბორატორიის დაწყებამდე სტუდენტებს უნდა ჰქონდეთ შემდეგი ტექნიკური უნარები და თეორიული ცოდნა:

• ჩასვით პიპეტის წვერი ხელით პიპეტზე
• ხმის კორექტირება ხელით პიპეტებისთვის
• დნმ-ის თეორიული ცოდნა ampლიფაცია და გელის ელექტროფორეზი

პროცედურის გზამკვლევი

1. დასრულდაview და რეview სახელმძღვანელო პროტოკოლის (ნაწილი პირველი) ~ 10 წუთი
   მოსწავლეებმა უნდა წაიკითხონ ლაბორატორია კლასში მოსვლამდე, მაგრამ დაგეგმონ რამდენიმე მომენტი დაუთმონ ლაბორატორიის სესიას, აუხსნან მიზანი და უპასუხონ სტუდენტთა კითხვებს.
   სახელმძღვანელო E. coli-ს სკრინინგის PCR კოლონიის პროტოკოლის სტუდენტები, რომლებიც ჩართავენ ავტომატიზაციას, არის შემდეგი:
   მოამზადეთ PCR მასტერ მიქსი:
   1. გამოთვალეთ თითოეული მასტერმიქსის მოცულობა E. coli კოლონიის PCR კალკულატორი.
   2. სვეტის "uL ძირითადი მიქსისთვის" გამოყენებით დაამატეთ თითოეული რეაგენტის გამოთვლილი რაოდენობა თითოეულ მთავარ მიქსზე 1.5 მლ მილში.
   3. აკრიფეთ 20 μL ძირითადი ნარევი ზოლის ან ფირფიტის თითოეულ ჭაბურღილში.
   ჩაძირეთ კოლონიაში და გაუშვით PCR (გაითვალისწინეთ, რომ არ არსებობს ამ ნაბიჯების ავტომატიზაციის საშუალება ჩვენს ამჟამინდელ OT-2-ში):
   4. აიღეთ კოლონიის ძალიან მცირე რაოდენობა თეფშიდან და ჩაყარეთ იგი პირველ PCR მილში.
   5. გაიმეორეთ თითოეული დარჩენილი PCR მილისთვის, ახალი წვერის გამოყენებით თითოეული კოლონიისთვის.
   6. დაახურეთ PCR მილები, გადაიტანეთ ისინი თერმოციკლერში და შეასრულეთ შესაბამისი პროტოკოლი.
2. OT-2 პროტოკოლის შედგენა Opentrons პროტოკოლის დიზაინერზე (ნაწილი მეორე) ~ 35 წუთი
   თითოეული სტუდენტი გამოიყენებს Opentrons პროტოკოლის დიზაინერი მათი პროტოკოლის შესაქმნელად შემდეგი ინსტრუქციების გამოყენებით:
   1. თქვენ მოგეცემათ ინსტრუქცია აღწეროთ რობოტისთვის სასურველი დაყენება, რა ინსტრუმენტები და ნაწილები დაგჭირდებათ და სად მიდიან ისინი. ეს არის "File” ჩანართი მარცხენა მხარეს.
   2. შემდეგ მოგეთხოვებათ აღწეროთ პროტოკოლში ჩართული სითხეები. ეს მხოლოდ უნდა იყოს საწყისი სითხეები და არა ის, რასაც თქვენ გააკეთებთ.
   3. და ბოლოს, თქვენ უნდა მიუთითოთ სად გადაინაცვლებს ყველა სითხე, რათა შეასრულოთ სასურველი პროტოკოლი, თქვენი პროტოკოლის „დიზაინი“.
   ლაბორატორიის ამ ნაწილის განმავლობაში, დაგეგმეთ ინდივიდუალურად შემოწმება სტუდენტებთან და ნახეთ, როგორ ხვდებიან ისინი. შეახსენეთ მათ, რომ იფიქრონ ეფექტურად და თავიდან აიცილონ პოტენციური ჯვარედინი დაბინძურება.
3. პროტოკოლების წარდგენა, კონსენსუსის პროტოკოლის შესახებ გადაწყვეტილების მიღება ~ 15 წუთი
   სტუდენტებმა მოკლედ უნდა წარმოადგინონ თავიანთი ოქმები და მათი დასაბუთება. როგორც კლასში, სტუდენტები განსაზღვრავენ კონსენსუსის პროტოკოლს, რომელსაც აწარმოებს ინსტრუქტორი.
   დაგეგმეთ ამ დროის განმავლობაში გარკვეული სივრცის შექმნა ჯანსაღი დებატებისა და კრიტიკული აზროვნებისთვის.
4. გაშვების პროტოკოლი, კოლონიაში ჩაძირვა, PCR როგორც კლასი (ნაწილი მესამე) ~ 1.5 საათი
   მას შემდეგ რაც კლასმა გადაწყვეტს კონსენსუსის პროტოკოლს, თქვენ გაუშვით პროტოკოლი, კოლონიის ჩაძირვა და PCR.
   თქვენ შეიძლება გადაწყვიტოთ, რომ ეს განყოფილება უფრო მიმზიდველი გახადოთ, ამ ლაბორატორიის სხვადასხვა ნაწილის შესასრულებლად სტუდენტები მოხალისეების აღზრდით.
   და სანამ PCR მუშაობს, შეგიძლიათ კლასში განიხილოთ ავტომატიზაციის ნაკლოვანებები და შესაძლებლობები, უპასუხოთ კითხვებს ან მიეცით საშუალება სტუდენტებს იმუშაონ ლაბორატორიის ანგარიშზე მცირე ჯგუფებში.

ლაბორატორიის ანგარიში

ინსტრუქციები
დაავალეთ სტუდენტებს მოამზადონ ყოვლისმომცველი ლაბორატორიული ანგარიში, რომელიც დაეხმარება მათ დაფიქრდნენ თავიანთ შედეგებზე და OT-2 ავტომატიზაციაზე. ძიების რამდენიმე იდეა მოცემულია ქვემოთ:

1. კოდის გადართვის აქტივობა: Opentrons-ის კოდის ყველა გვერდი აფეთქდა თქვენი მაგიდიდან, როცა კარი გააღეთ!
   გაარკვიეთ რა ხდება კოდის თითოეულ გვერდზე და შემდეგ დააბრუნეთ ისინი სწორი თანმიმდევრობით.
   a. ლურჯი
   b. მწვანე
   c. წითელი
2. გადახედეთ თქვენს მიერ მომზადებულ OT-2 პროტოკოლს. შეგიძლიათ განსაზღვროთ რაიმე შესაძლებლობა თქვენი ავტომატიზაციის უფრო ეფექტური გახადოს?
3. იდენტიფიცირეთ რამდენიმე კრიტიკული წერტილი თქვენს პროტოკოლში, სადაც შეიძლება რაღაც არასწორედ მოხდეს ავტომატიზაციის დროს (მაგ: ჯვარედინი დაბინძურება ან რეაგენტის ამოწურვა). როგორ შეგიძლიათ მიმართოთ მათ?
4. Review და მიამაგრეთ გელის ელექტროფორეზის შედეგების სურათი ამ ლაბორატორიას. როგორ განმარტავთ ამ შედეგებს?

სტუდენტური გზამკვლევი PCR კოლონიის სკრინინგი

მიზანი
თქვენი მიზანი დღეს არის კოლონიების იდენტიფიცირება, რომლებიც შეიცავენ სწორად აწყობილ პლაზმიდურ დნმ-ს PCR-ის გამოყენებით, რომელიც დანერგილია OT-2 სითხეების დამუშავების რობოტში და Opentrons პროტოკოლში.
დიზაინერი.
ამისათვის დაგჭირდებათ:

• იდენტიფიცირება პრაიმერები, რომლებიც ampგააცოცხლეთ ფრაგმენტი, რომელიც მოიცავს შეერთებას ვექტორის ხერხემალსა და ჩასმას შორის
• გაიგეთ სახელმძღვანელო E. coli PCR კოლონიის სკრინინგის პროტოკოლი
• გამოიყენეთ პროტოკოლის დიზაინერი OT-2 E. coli PCR კოლონიის სკრინინგის პროტოკოლის შესაქმნელად

საჭირო აღჭურვილობა
პიპეტები და რჩევები:

• P20 ერთარხიანი GEN2
• P300 ერთარხიანი GEN2
• Opentrons 96 Tip Rack 20 μL
• Opentrons 96 Tip Rack 300 μL

მოდულები და ლაბორატორია:

• გამათბობელი-შეიკერი GEN1
• NEST 96 Well Plate 100 μL PCR სრული ქვედაკაბა
• Opentrons 24 მილის საკიდი Eppendorf 1.5 მლ Safe-Lock Snapcap-ით

რეაგენტები:

• DI წყალი
• OneTaq® PCR მასტერ მიქსი
• Forward Primer 1
• საპირისპირო პრაიმერი 1
• Forward Primer 2
• საპირისპირო პრაიმერი 2

ექსპერიმენტული პროცედურა
ფონი
E. coli-ში და სხვა ბაქტერიების უმეტესობის, ისევე როგორც ძუძუმწოვრების უჯრედების დნმ-ზე PCR-ის გასაკეთებლად, ჩვენ შეგვიძლია მხოლოდ ორგანიზმის რამდენიმე უჯრედი ჩავდოთ PCR-ში და საწყისი დენატურაციის საფეხური მოახდინოს დნმ-ის გამოთავისუფლების უჯრედების ლიზირება. ყველაზე გავრცელებული პრობლემა, რომელიც ჩნდება ამ პროტოკოლთან დაკავშირებით, არის ის, რომ თქვენ აყენებთ ძალიან ბევრ უჯრედს რეაქციაში და არის ძალიან ბევრი არასპეციფიკური დნმ და სხვა მოლეკულები, რომლებმაც შეიძლება ხელი შეუშალონ პოლიმერაზას. სხვა ორგანიზმები, როგორიცაა სოკოები და მცენარეები, შეიცავს იმდენ შემაფერხებელ მასალას, კერძოდ მათ უჯრედულ კედლებს, რომ უფრო მკაცრი ლიზისია საჭირო. ჩვენ, როგორც წესი, ვაკეთებთ ყინვა-დათბობის რამდენიმე ციკლს, ნატრიუმის ჰიდროქსიდის ლიზას ან თხევადი აზოტით დაფქვას ამ უფრო რთული ორგანიზმებიდან დნმ-ის გასათავისუფლებლად.
მიუხედავად ამისა, აქ მთავარი ისაა, რომ თქვენ არ გჭირდებათ ბევრი უჯრედი, რომ გქონდეთ ბევრი დნმ რეაქციაში. სინამდვილეში, E. coli-სთვის, თქვენ არ გსურთ, რომ უჯრედული ხსნარი, რომლის დამუშავებას და PCR-სთვის გამოყენებას აპირებთ, იყოს მოღრუბლული, ან მიკრობიოლოგიური ჟარგონით „ბუნდოვანი“. თქვენ ძლივს უნდა დაინახოთ უჯრედები, რომლებიც იშლება ხსნარში.
როგორც წესი, მიკრობიოლოგები ქმნიან PCR რეაქციის ნარევს მთავარ მიქსად (ერთ მილში საჭირო ყველა რეაქციით) და შემდეგ ანაწილებენ მას ცალკეულ მილებს. თქვენ არ გჭირდებათ დიდი მოცულობა, 20 μL ზოგადად საკმარისია ზოლის სანახავად, განსაკუთრებით თუ გელის ჩამოსხმისას ვიწრო სავარცხელს იყენებთ. შემდეგ ჩაასხით წვერი კოლონიის მცირე რაოდენობით თითოეულ PCR ტუბში და აურიეთ ნაზად. (რჩევა: დატოვეთ წვერი ხსნარში კოლონიების აკრეფამდე, რათა არ დაკარგოთ ადგილი თეფშში ან მილების ზოლში.)
დღეს ჩვენ გამოვიყენებთ პრაიმერების ორ განსხვავებულ კომპლექტს, რათა აღმოვაჩინოთ ჩვენი პლაზმიდების სწორი შეკრება 15 სხვადასხვა კოლონიისთვის, ისევე როგორც ნეგატიური კონტროლი, ჩვენი პლაზმიდი, რომელიც გამოვიყენეთ ხერხემალისთვის.
ეს იქნება სულ 32 განსხვავებული PCR. მიუხედავად იმისა, რომ არ არის საშინელი კოლონიური PCR-ების შედგენა, შეგიძლიათ დაიწყოთ იმის დანახვა, თუ როგორ ხდება ამ მასშტაბის პიპეტინგი დამღლელი და შეცდომის დაშვება ადვილი იქნება. მასტერ მიქსის მეთოდი ნამდვილად ეხმარება, მაგრამ ნაკლებად განმეორებად საკითხებში, Opentrons ძალიან ეხმარება. ამ პროტოკოლის შექმნა OT-2-ში, იმედია, იქნება ძალიან მიღწევადი, მაგრამ საჩვენებელი პროტოკოლი, რათა გაგაცნოთ ლაბორატორიის ავტომატიზაცია.

ნაწილი პირველი: რეviewსახელმძღვანელო E. coli PCR კოლონიის სკრინინგის პროტოკოლი
ამ ლაბორატორიაში თქვენი მიზანია შექმნათ ავტომატური Opentrons OT-2 პროტოკოლი, რომელიც გაიმეორებს შემდეგ სახელმძღვანელოს E. coli კოლონიის PCR პროტოკოლს:
მოამზადეთ PCR მასტერ მიქსი:

1. გამოთვალეთ თითოეული მასტერმიქსის მოცულობა E. coli კოლონიის PCR კალკულატორი.
2. სვეტის "uL ძირითადი მიქსისთვის" გამოყენებით დაამატეთ თითოეული რეაგენტის გამოთვლილი რაოდენობა თითოეულ მთავარ მიქსში 1.5 მლ მილში.
3. აკრიფეთ 20 μL ძირითადი ნაზავი ზოლის ან ფირფიტის თითოეულ ჭაბურღილში.
   ჩაძირეთ კოლონიაში და გაუშვით PCR (გაითვალისწინეთ, რომ არ არსებობს ამ ნაბიჯების ავტომატიზაციის საშუალება ჩვენს ამჟამინდელ OT-2-ში):
4. აიღეთ კოლონიის ძალიან მცირე რაოდენობა თეფშიდან და ჩაყარეთ იგი პირველ PCR მილში.
5. გაიმეორეთ თითოეული დარჩენილი PCR მილისთვის, ახალი წვერის გამოყენებით თითოეული კოლონიისთვის.
6. დაახურეთ PCR მილები, გადაიტანეთ ისინი თერმოციკლერში და შეასრულეთ შესაბამისი პროტოკოლი.

ნაწილი მეორე: თქვენი OT-2 პროტოკოლის შექმნა
თქვენი პროტოკოლის შესაქმნელად, გახსენით Opentrons პროტოკოლის დიზაინერი.

1. თქვენ მოგეცემათ ინსტრუქცია აღწეროთ რობოტისთვის სასურველი კონფიგურაცია, რა ინსტრუმენტები და ნაწილები დაგჭირდებათ და სად მიდიან ისინი. ეს არის "File” ჩანართი მარცხენა მხარეს.
2. შემდეგ მოგეთხოვებათ აღწეროთ პროტოკოლში ჩართული სითხეები. ეს მხოლოდ უნდა იყოს საწყისი სითხეები და არა ის, რასაც თქვენ გააკეთებთ.(გაითვალისწინეთ, რომ შეგიძლიათ გამოიყენოთ „Serialize“ ჩამრთველი პროტოკოლის დიზაინერში ამ განსხვავებული პრაიმერების შესაქმნელად. ასევე გაითვალისწინეთ, რომ მოცულობების მითითებისას ეს არის ის, რაც მოგვიანებით შეგვიძლია შევცვალოთ, უბრალოდ დარწმუნდით, რომ თქვენს მიერ დაყენებული ტომი აქვს აზრს და აღემატება მას. ფიქრობთ, რომ დაგჭირდებათ.)
3. და ბოლოს, თქვენ უნდა მიუთითოთ, სად გადაინაცვლებს ყველა სითხე, რათა შეასრულოთ სასურველი პროტოკოლი, თქვენი პროტოკოლის „დიზაინი“.
   თქვენი OT-2 პროტოკოლის შემუშავებისას იფიქრეთ იმაზე, თუ როგორ შეგიძლიათ გახადოთ ის ყველაზე ეფექტური. შეამოწმეთ გაფართოებული პარამეტრები "გადაცემის ხატულაზე". ასევე შეგიძლიათ გამოიყენოთ სხვადასხვა ბილიკები რჩევების შესანახად. უბრალოდ იყავით ფრთხილად და დარწმუნდით, რომ არ დააბინძუროთ რეაგენტები ან არ გააფუჭოთ
   ჩვენი ექსპერიმენტი ჯვარედინი დაბინძურების შესახებ. ამ ხაზების გასწვრივ, ასევე შეეცადეთ იფიქროთ იმაზე, რაც შეიძლება არასწორედ წარიმართოს, მაგალითად, რეაგენტის ამოწურვა და დარწმუნდით, რომ დაარეგისტრირეთ ისინი, რადგან ეს შეიძლება სასარგებლო იყოს თქვენი პროტოკოლის გამართვისას და დარწმუნდით, რომ საბოლოო მომხმარებელმა იცის თქვენი კრიტიკული წერტილების შესახებ. პროტოკოლი.
   პროგრამულ უზრუნველყოფას შეიძლება გარკვეული დრო დასჭირდეს შეჩვევას, მაგრამ შეგიძლიათ დააწკაპუნოთ და შეეგუოთ მას საკმაოდ სწრაფად და საბოლოოდ ეს საკმაოდ ინტუიციურია. როგორც დაინახავთ, ამას ბევრი დაწკაპუნება სჭირდება პროტოკოლის დასაზუსტებლად, რომელიც შესაძლოა უფრო სასარგებლო იყოს, თუ ის დაიწერებოდა პითონში და ადვილად შეიცვლება s-ის დასამატებლად.amples ან ახალი რეაგენტები.
   თქვენი პროტოკოლის დასრულების შემდეგ დაბრუნდით "File”და ექსპორტზე. ეს საშუალებას მოგცემთ მოგვიანებით შემოიტანოთ იგი ან ატვირთოთ OT-2-ზე.
4. როგორც კლასში, თითოეული სტუდენტი მოკლედ წარადგენს თავის პროტოკოლს და ერთად გადავწყვეტთ OT-2-ზე გასაშვებად საბოლოო კლასის პროტოკოლს.

დაწყება
გაკვეთილის გეგმის სწავლებამდე შეასრულეთ შემდეგი ნაბიჯები გაკვეთილის დაწყებამდე.

• ამოიღეთ ყუთი OT-2
• დააყენეთ Opentrons აპი
• მიამაგრეთ პიპეტები
• გემბანის დაკალიბრება
• დაკალიბრეთ წვერის სიგრძე და პიპეტის გადაადგილება
• ნებისმიერი დაკავშირებული პროტოკოლის იმპორტი აპში
• OT-2-ზე პროტოკოლის ტესტირება

გჭირდებათ დამატებითი მხარდაჭერა?

ტექნიკური მხარდაჭერისთვის, გთხოვთ, შეამოწმოთ ჩვენი Opentrons დახმარების ცენტრი შესაბამისი სტატიებისთვის. თუ გჭირდებათ დამატებითი მხარდაჭერა, გთხოვთ დაუკავშირდეთ support@opentrons.com.
თუ თქვენ გაქვთ შეკითხვები გაკვეთილის გეგმასთან დაკავშირებით, გთხოვთ დაუკავშირდეთ
ავტორს, კლეი რაიტი, დოქტორი, ზე wrightrc@vt.edu.

დოკუმენტები / რესურსები

Opentrons OT-2 თხევადი მართვის რობოტი [pdf] მომხმარებლის სახელმძღვანელო OT-2, OT-2 თხევადი რობოტი, თხევადი რობოტი, რობოტი, რობოტი

ცნობები

• მომხმარებლის სახელმძღვანელო